作為疫苗領(lǐng)域的研究熱點，DNA疫苗能同時誘導(dǎo)體液免役和特異性的Thl型及CTL型免役應(yīng)答，與傳統(tǒng)疫苗相比有明顯優(yōu)勢。應(yīng)用DNA疫苗免役后，抗原編碼的DNA直接在宿主細胞內(nèi)合成表達，其誘導(dǎo)的免役應(yīng)答與病原體自然感染產(chǎn)生的免役應(yīng)答極為相似，故具有安全、穩(wěn)定、生產(chǎn)方便和在體內(nèi)介導(dǎo)抗原長期表達等優(yōu)點。

DNA疫苗通過多種途徑進入體內(nèi)，組織細胞(如肌細胞、皮膚角朊細胞)直接攝取質(zhì)粒DNA，被攝取的質(zhì)粒DNA分子在特定啟動子作用下，在細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄為mRNA，mRNA進而與游離核糖體相結(jié)合，再被轉(zhuǎn)移至細胞質(zhì)內(nèi)翻譯成抗原蛋白分子，表達出的抗原蛋白分子被分泌到細胞外、結(jié)合到細胞膜上或局限于細胞漿內(nèi)，這些抗原蛋白經(jīng)過內(nèi)吞、溶酶體降解、與MHC分子結(jié)合后呈遞給初始型T細胞。然后該途徑誘導(dǎo)產(chǎn)生Th2淋吧細胞主導(dǎo)的免役應(yīng)答與獲得性體液免役，機體獲得有效的保護性抗體以抵抗病原菌的侵害。

如何將DNA疫苗高效運送至宿主細胞內(nèi)讓其發(fā)揮作用是影響DNA疫苗免役效果的重要因素之一。傳統(tǒng)的直接肌肉注射裸DNA的方式雖然簡單安全，但其使DNA導(dǎo)入細胞中的效率較低，僅有很少量的質(zhì)粒DNA能被肌纖維所攝取，其余大多數(shù)質(zhì)粒DNA在細胞外被降解，這直接導(dǎo)致外源基因表達水平降低。顯然，如果能更高效地將DNA疫苗遞送入機體細胞，將會使DNA疫苗免役效果大大提高。體內(nèi)電穿孔技術(shù)是一種比較理想的基因遞送新技術(shù)，其原理是通過瞬時電擊靶組織誘導(dǎo)生物膜(包括細胞外膜，核膜，細胞器膜等)的瞬時穿透，增加了細胞對外源DNA的攝取。研究已證實體內(nèi)電穿孔可以在不同的靶組織中(包括肌肉、皮膚、肝、肺、腫瘤等組織以及不同種類的動物中(包括小鼠、兔子、豬、羊、牛及猴子等動物)提高DNA進入細胞的效率及外源基因的表達水平。而且電穿孔導(dǎo)致的輕微組織損傷還可以提供一種“危險信號”，誘導(dǎo)產(chǎn)生炎性細胞因子和淋吧細胞浸潤，從而起到“佐劑”效應(yīng)，增強免役應(yīng)答。

BTX的Agile Pulse In Vivo系統(tǒng)是疫苗和免役接種研究者的理想選擇。系統(tǒng)根據(jù)皮下接種（ID）和肌肉接種（IM）的應(yīng)用特點分別配置了特別設(shè)計的針形矩陣電極，并且對電轉(zhuǎn)染儀的程序進行了特別優(yōu)化，獲得更高的轉(zhuǎn)染效率。電穿孔技術(shù)配合質(zhì)粒注射技術(shù)使用，在基因表達及持續(xù)性和產(chǎn)生免役原性上顯示出高達100倍的增長。Pulse Agile技術(shù)，首先利用短時間高強度的脈沖使細胞膜產(chǎn)生通透性，再利用低強度脈沖促進DNA導(dǎo)入細胞，配合多針矩陣電極的使用，大大促進了抗原在細胞內(nèi)的表達。

Karolinska學(xué)院Anderson的教授發(fā)現(xiàn)通過AgilePulse InVivo電穿孔系統(tǒng)能顯著提高小鼠的免役應(yīng)答能力。在該研究中，他將帶有熒光素酶報告基因的疫苗質(zhì)粒注射到小鼠皮下，并在小鼠皮下進行電穿孔，然后在不同的時間成像。他發(fā)現(xiàn)在DNA注射和電穿孔后30分鐘，蛋白質(zhì)就開始表達了。

有進行電穿孔(紅色)的所有結(jié)果都有一致的高水平的表達，而注射后沒有電穿孔(藍色)的表達水平較低，不太一致。直接注射和進行電穿孔的表達相差近100倍。

 現(xiàn)階段，AgilePulseInVivo系統(tǒng)由于它的易用性、重復(fù)性、高效率和電極選配的多樣性，成為疫苗和免役接種研究者的理想選擇。

結(jié)果可靠

AgilePulse平行針形矩陣電極在電擊區(qū)域內(nèi)產(chǎn)生均勻的電場，使組織得到有效的轉(zhuǎn)染，通過內(nèi)置軟件監(jiān)測電極阻抗，以確保電極插入位置和實驗的可靠性。

簡單快速

簡單且有效的皮下和肌肉電極設(shè)計可使DNA導(dǎo)入時間縮小到小于1秒，電極提供均勻的電場來覆蓋靶向的組織區(qū)域。4針或6針針形矩陣電極長度選擇從2毫米到16毫米，容易穿透皮膚或肌肉層到達靶細胞，用于高效基因?qū)搿?/span>

磚利的Pulse Agile技術(shù)

Pulse Agile分段脈沖導(dǎo)入技術(shù)，首先通過一系列短而高強度脈沖增加細胞膜通透性，再利用低強度脈沖促進質(zhì)粒導(dǎo)入細胞，這樣在提高效率同時也保證了細胞存活率。與普通的電穿孔相比，這項技術(shù)可以明顯增強抗原特異性CD8+T細胞的免役反應(yīng)。

參考文獻

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